胰岛素

1.猪或牛胰脏经速冻、搅拌、抽提等处理，制得胰岛素晶种原纤维，后者经离心形成胰岛素纤维，最后纯化和干燥制得。

2.分级提取直接锌盐沉淀法

将冻胰用刨胰机刨碎，加入2.3～2.6倍86%～88%乙醇和5%的草酸，在10～15℃搅拌提取3H ，离心。滤渣用1倍量68%～70%乙醇和0.4%的草酸提取2h，离心分离。两次提取液合并。提取液在搅拌下加入浓氨水调ph8.0～8.4（ 液温10～15 ，立即过滤，除去碱性蛋白，得澄清滤液。滤液用硫酸酸化至ph3.6-3.8，降温至5℃，静置4h ，使酸性蛋白充分沉淀。吸上层清液至减压浓缩罐中，下层用帆布过滤。滤液并入上清液，在30℃以下减压蒸去乙醇，浓缩至原体积的1／9～1／10。浓缩液转入去脂锅内，快速加热至50℃后，立即用冰盐水降温至5℃，静置3～4h，分离出下层清液 （ 上层脂层也可回收胰岛素） ，调节ph2.3～2.5，于20～25搅拌下加入27g/l体氯化钠，保温静置约2h 。析出的盐析物即为胰岛素粗品。盐析物按干重计算，加入7倍量蒸馏水溶解，再加入3倍 量 的 冷 丙 酮，用4mol／l 氨 水 调ph4.2～4.3，然后补充丙酮，使溶液中水和丙酮的比例为7∶3。充分搅拌，低温放置过夜，使溶液冷至５℃以下，次日在低温下离心分离，或滤出沉淀，得除酸性蛋白的滤液。在滤液中加4mol／l氨水使ph为6.2～6.4，按溶液体积加3.6%的20%醋酸锌溶液，再用4mol／l氨水调至ph6.0，低温置过夜，次日过滤，分出沉淀。沉淀用冷丙酮洗涤，得干品 （ 每kg胰脏可得0.1～0.125g干品） 。按干品重量每克加冰冷2%柠檬酸50ml、65%醋酸锌溶液2ml、丙酮16ml，并用冰水稀释至100ml，使充分溶解。然后冷到5℃以下，用4mol／l氨水调ph8.0，迅速过滤。得除碱性蛋白的滤液。滤液立即用10%柠檬酸溶液调ph为6，并补加丙酮，使整个溶液体系保持丙酮含量16%。然后慢速搅拌3～5h，使结晶析出，再转入5℃左右冷室放置3～4d，使结晶完全。离心收集结晶，并小心去除上层灰黄色的无定形沉淀，用蒸馏水或醋酸铵溶液洗涤，再用丙酮、乙醚脱水，离心，干燥，即得胰岛素结晶。